亚洲日本欧美在线 I 精品亚洲国产成人av制服 I 亚洲成人精品在线播放 I 国产在线观看免费视频软件 I 亚洲老女人高潮呻吟久久网站 I 桃色免费视频 I 欧美a∨亚洲欧美亚洲 I 五月开心婷婷 I 97免费视频在线 I 韩国久久精品 I 三个男吃我奶头一边一个视频 I 久久久综合久久久 I 欧美夜夜骑 I 午夜精品一码二码三码 I 欧美偷窥清纯综合图区 I 久久人妻少妇嫩草av蜜桃 I 六月婷婷激情 I 久久人人97超碰精品888 I 成人在线观看你懂的 I 国产一区二区三区精品视频 I 视频区 图片区 小说区 I 成人午夜特黄aaaaa片男男 I 国产在线精品一区二区中文 I 国产成人亚洲精品 I 国产精品综合色区小说 I 日韩国产欧美一区 I 一级特黄a I 4438x成人全国最大 I 欧美黄色免费大片 I 国产精品老热丝在线观看 I 日韩大尺度大片在线观看 I 女同视频网站 I 永久av免费在线看 I 男人天堂午夜影院 I 国产黄色片中文字幕

　　用lip2000脂質體2000進行轉染時，首先需要優化轉染條件，應找出該批LR對轉染某一特定細胞適合的用量、作用時間等，對每批LR都要做。先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細胞相互作用的時間，DNA可從1-5ug和孵育時間6h，開始，按這兩個參數繪出相應LR需用量的曲線，再選用LR和DNA兩者*的劑量，確定出轉染時間。因LR對細胞有一定的毒性，轉染時間以不超過24h為宜。COS-7、BHK、NIH-3T3、Hela和Jurkat等任何一種細胞均可作為受體細胞。

　　lip2000脂質體2000的轉染方法常見有兩種，具體如下：

　　一、快速lip2000脂質體2000轉染法操作步驟

　　(1)將細胞以5 x 10^5個/孔接種于6孔板中培養24h，使其達到50%-60%板底面積。在試管中配制DNA-脂質體復合物。

　　a、在1ml無血清DMEM中稀釋PSV1-neo質粒DNA或供體DNA。

　　b、旋轉1s，再加入脂質體懸液，旋轉。

　　c、室溫下放置5-10min，使DNA結合在脂質體上。

　　(2)棄去細胞中的舊液，用1ml無血清DMEM洗細胞1次后棄去，向每孔中直接加入1mlDNA-脂質體復合物，37℃培養3-5天。

　　(3)再于每孔中加入含20%胎牛血清的DMEM，繼續培養14-24h。

　　(4)吸出DMEM-DNA-脂質體混合物加入新鮮含10%胎牛血清的DMEM，2ml/孔，再培養24-48h。

　　(5)用細胞刮或消化法收集細胞，以備分析鑒定。

　　二、穩定的lip2000脂質體2000轉染法

　　接種細胞同前述，細胞長至50%板底面積可用于轉染。

　　DNA-脂質體復合物制備轉染細胞同前。

　　在每孔中加入1ml含20%胎牛血清的DMEM，37℃培養48h。

　　吸出DMEM，用G418選擇性培養基稀釋細胞，使細胞生長一定時間，篩選轉染克隆，方法參照細胞克隆篩選法進行。